Oxoid抗微生物藥物敏感性試驗紙片操作流程

操作流程：

提供的材料：Oxoid抗微生物藥物敏感性試驗紙片。

需要但沒有提供的材料：用適當培養(yǎng)基制成的瓊脂平板、接種用的混懸培養(yǎng)基、無菌接種環(huán)和拭子、無菌鑷子、麥氏濁度標準液、培養(yǎng)箱、改良的氣體環(huán)境、抗生素紙片分配器、質控菌種、測量抑菌環(huán)大小的裝置和當?shù)貥藴史椒ǖ呐凶x標準。

方法：Oxoid藥敏紙片可能會與各種標準檢測方法一起使用，包括但不限于BSAC、CDS、DIN、CLSI M2或EUCAST，請參見現(xiàn)行的當?shù)刂改希檎姨囟ㄐ畔ⅲ缤扑]的培養(yǎng)基、接種物濃度水平和培養(yǎng)條件等。

質控程序：建議以適當?shù)拈g隔檢測質控菌株，可以在每次做試驗時進行，也可以根據(jù)國家標準機構提供的抗生素敏感性檢測指南推薦的程序。如果質控微生物對特定抗生素的檢查結果在規(guī)定的范圍以外，不得報告患者的檢查結果，并不得使用該藥敏紙片，直至確定了產(chǎn)生這種不一致結果的原因（例如培養(yǎng)基、灌裝量、接種物、培養(yǎng)條件、質控菌株或者藥敏紙片儲存或使用不正確）。

限制：本產(chǎn)品供體外診斷使用，僅用于指示供試微生物的體內(nèi)敏感性。選擇何種抗微生物藥物進行測試和報告必須由每個臨床實驗室來決定。臨床醫(yī)生負責決定使用何種抗生素對抗供試微生物，同時應考慮可能影響藥物體內(nèi)活性的其它因素。

臨床實驗室標準化協(xié)會（CLSI）方法小結（其它標準有所不同）：培養(yǎng)基：Mueller-Hinton瓊脂用于檢測非苛養(yǎng)微生物。Mueller-Hinton加5%綿羊血用于檢測腦膜炎奈瑟氏菌和鏈球菌，GC瓊脂加1%規(guī)定的生長添加劑用于檢測淋病奈瑟氏菌。嗜血桿菌檢測培養(yǎng)基用于檢測流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌。其它苛養(yǎng)菌或很少檢測的細菌所用的培養(yǎng)基和檢測條件可在CLSI M45中找到。平板和藥敏紙片在使用前要在室溫下平衡。平板在接種細菌前不應太潮濕。

供試微生物：采取適當?shù)臋z測方法來核實供試微生物的推測鑒定結果。采用直接菌落法或生長法制備標準化的接種物并在制備好的15分鐘內(nèi)接種到平板上：生長法－用接種環(huán)蘸取3至5個形態(tài)上相似的菌落，并將其轉移到4-5 ml的胰蛋白胨大豆肉湯或

類似培養(yǎng)基中。在35℃下培養(yǎng)2-6小時。用無菌鹽水或肉湯調(diào)整濁度，使?jié)岫鹊扔?.5 麥氏濁度標準（制備0.5 麥氏濁度標準液：將0.5 ml的0.048M 氯化鋇[1.175% 重量/體積 BaCl₂ ·2H₂O]加入99.5 ml 0.18 mol/l硫酸[1% 體積/體積]中－將這一標準液置于暗處）。直接菌落法（葡萄球菌和鏈球菌的方法）－從非選擇性瓊脂上挑取分離的菌落，加入無菌鹽水或肉湯中，并制成等于0.5 麥氏濁度標準的菌懸液。

接種：將無菌拭子浸入菌懸液中，對著試管壁旋轉按壓，擠出多余的液體。沿著至少三個方向涂布平板表面。應在接種的15分鐘內(nèi)將藥敏紙片放到平板上。

藥敏紙片：使用前要將藥敏紙片放置于室溫下。每塊平板推薦的試驗藥敏紙片數(shù)量如下：

在貼上藥敏紙片的15分鐘內(nèi)翻轉平板，并按照下面的規(guī)定培養(yǎng)

*葡萄球菌和腸球菌需要培養(yǎng)24小時。耐甲氧西林的葡萄球菌可能在溫度超過35℃的條件下檢測不出來。

判讀：培養(yǎng)后，測量細菌生長*抑制區(qū)域的直徑，到mm。抑菌環(huán)的邊緣應為肉眼可以發(fā)現(xiàn)的無明顯微生物生長的區(qū)域。血平板的結果利用反射光從平板的上表面讀取（不用讀取溶血環(huán)的邊緣，而是細菌生長的邊緣）。所有其它培養(yǎng)基要使用黑色背景和反射光從平板的背面判讀（葡萄球菌和腸球菌除外，它們采用投射光讀取－有微弱的生長表明有耐藥性）。如果是變形桿菌，忽略在明顯的抑菌環(huán)上生長的一層薄薄菌膜。對結果進行判讀的完整說明可依照CLSI方法，請參考現(xiàn)行的CLSI M100標準。下表只詳細說明了在CLSI標準中的那些藥物/濃度。與其它標準方法一起使用的其它藥物和濃度可從Oxoid獲得，但沒有在本說明書中詳細列出。

*部分摘自CLSI文件M100-S20（M02-A10）：“藥敏紙片擴散法補充表”抗微生物藥物敏感性試驗性能標準。可從臨床和實驗室標準化協(xié)會（940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA 19807）獲得完整的標準。